|
Description
|
การศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อแยกและทำบริสุทธิ์ไวรัสโรคหลอดลมอักเสบติดต่อในไก่จาก allantoic fluid และทดสอบคุณสมบัติทาง Immunology เบื้องต้น การเเยกไวรัสหลอดลมอักเสบติดต่อในไก่ และทำให้บริสุทธิ์ด้วยการปั่นแยกไวรัสที่ได้จากไข่ไก่ฟักอายุ 9-10 วัน โดยใช้เครื่อง Ultracentrifuge (Beckman Coulter XL-A) ผ่าน 20% sucrose gradient ปั่นเหวี่ยงที่ 98,000 x g ที่อุณหภูมิ 4?C เป็นเวลา 2 ชั่วโมง จากนั้นละลายตะกอนด้วย TNE buffer นำตัวอย่างที่ได้ไปปั่นผ่าน 30-50% sucrose gradient ปั่นเหวี่ยงที่ 98,000 x g อุณหภูมิ 4?C เป็นเวลา 3 ชั่วโมง 30 นาที จะพบแถบวงแหวนสีขาวที่ชั้น 30% sucrose เมื่อนำวงแหวนไปวิเคราะห์ขนาดโปรตีนของไวรัสด้วยวิธี SDS-PAGE โดยใช้ 10% polyacrylamide gel พบว่าแถบวงแหวนสีขาวเป็นไวรัสบริสุทธิ์ประกอบด้วยโปรตีนที่มีขนาดน้ำหนักโมเลกุล 50 kDa จากผลการทดสอบด้วยวิธี western blot ชี้ให้เห็นว่าแอนติไวรัส IBV ที่แยกให้บริสุทธิ์นั้นสามารถทำปฏิกิริยากับซีรั่มไก่ที่ถูกฉีดกระตุ้นด้วยวัคซีนหลอดลมอักเสบติดต่อในไก่ได้ดี ดังนั้นจึงสามารถใช้วิธีการแยกและบริสุทธิ์ผ่าน sucrose gradient สำหรับเตรียมแอนติเจนเพื่อพัฒนาวิธีการตรวจวินิจฉัยโรคติดเชื้อหลอดลมอักเสบติดต่อในไก่ ส่งผลให้เกิดการวางแผนควบคุมป้องกันโรคได้อย่างรวดเร็วและมีประสิทธิภาพต่อไป |